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云南中医学院：林青、李秀芳、何晓山、周宁娜、代容、曹东
普洱茶是中国的传统名茶，由于其独特的品质风格，文化内涵及神奇的功效而闻名于国内外。大量历史文献资料表明，普洱茶发源地在云南普洱府所辖的历史区域，即现在的思茅地区、西双版纳州一带[1]。历史上所指的普洱茶,是以云南大叶种茶制成的晒青毛茶为原料,经自然发酵的茶叶,具有滋味醇厚、汤色红褐、陈香显著、叶底黄褐的品质特点,自古以来深受消费者的喜爱。现代普洱茶则分为直接再加工为成品的生普洱茶和经过人工速成发酵后再加工而成的熟普洱茶两大类，成品后都还持续进行着自然陈化过程，具有越陈越香的独特品质，故一般认为普洱茶以陈者质优，市售普洱茶也以陈者价高。近年来研究报导普洱茶具有促进免疫、降低血脂、减肥、抑菌、助消化、暖胃、生津、止渴、醒酒、解毒等多种保健功效[2]。但是至今尚未见对于普洱茶保健作用的系统药效学研究以及各年代间茶保健功效的比较研究。大益普洱茶是云南大益茶业集团享誉海内外的名牌产品，其保健功效的认同也仅限于茶友们饮用体验。本研究利用现代药理学的研究方法，以历代对普洱茶传统功效的认识为依据，结合近年来的临床与实验研究报导，首次对大益普洱茶的保健功效进行系统研究，并对不同年代大益普洱茶的保健功效进行比较研究。
一、实验材料
1、供试品与药品
1997、2001、2007三年代的生熟普洱茶由云南省西双版纳州大益普洱茶厂提供。
盐酸二甲胍肠溶片：貴州圣济堂制药有限公司，批号：20070612。
盐酸二甲双胍片：天津太平洋制药有限公司，生产批号071101。
非诺贝特片：上海医药(集团)有限公司信谊制药总厂，生产批号070118。
D-木糖：武汉市杰辉生物技术有限公司。
匹多莫德：太阳石药业，批号：070703。
环磷酰胺（Cy）：江苏恒瑞医药股份有限公司，批号：07101621。
赛尼可(奥利司他胶囊)：上海罗氏制药有限公司分装，分装批号：SH0209。
维生素E：厦门星鲨制药有限公司，批号：10872010。
D-半乳糖：国药集团化学试剂有限公司，批号：F20061025。
超氧化物歧化酶(SOD)活性测定试剂盒:南京建成生物工程研究所,批号：20070920。
丙二醛(MDA)活性测定试剂盒:南京建成生物工程研究所,批号：20070921。
D－木糖试剂盒:南京建成生物工程研究所,批号：20070921。
低密度脂蛋白胆固醇试剂盒：柏定生物工程（北京）有限公司生产，批号070426。甘油三酯试剂盒：四川省迈克科技生物技术有限公司生产，批号1107051。
高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒：柏定生物工程（北京）有限公司生产，批号070926。
总胆固醇试剂盒：四川省迈克科技生物技术有限公司生产，批号1007061。
血糖GOD－PAP法测定试剂盒：四川省迈克科技生物技术有限公司生产，批号1107051。
胰岛素放射免疫测定药盒：天津盛达生物科技有限公司生产，批号200708122。
胃蛋白酶测定试剂盒：南京建成生物工程研究所，批号：20070119。
2、主要仪器
752N紫外可见分光光度计；塞普利斯XS125A分析天平。
Anke TGL-16G(高速离心机)，上海安亭宁科学仪器厂。
Molecular Device SPECTRA max 340PC，塞普利斯XS125A分析天平。
UV－2550型紫外可见分光光度计：日本岛津仪器有限公司生产。
DFM－96型16管放射免疫γ计数器：众成机电技术公司生产。
3、动物
昆明种小鼠，清洁级，雌雄各半，体重20±2g，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，合格证号：SCXK(川)2004-16。
清洁级Wistar雄性大鼠，体重120～140g，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，合格证号：SCXK（川）1004-16。
4、饲料
标准饲料：玉米面43.6%，豆粉6%，豆粕14%，面粉20%，鱼粉1%，骨粉2%，豉皮10.6%，盐1%，玉米蛋白0.5%，油0.5%，矿物质0.8%。
高脂高糖造模饲料:2%胆固醇、10%猪油、10%蔗糖及78%标准饲料配制而成。
二、方法与结果
1、大益普洱茶对大鼠代谢综合征的影响
参照文献方法 [3,4,5]，并稍加改进。雄性Wistar大鼠144只，普通食水适应性饲养1周，然后按体重随机分为12组，即正常组（继续普通食水喂养，其余各组均给予高脂高糖饲料），模型组，阳性对照二甲双胍组（简称“二甲双胍组”，剂量：0.45g/kg体重）、阳性对照非诺贝特组（简称“非诺贝特组”，剂量：90mg/kg体重），2007年普洱生茶高剂量组（简称“07生高”，以下类推）、2007年普洱生茶低剂量组、2007年普洱熟茶高剂量组、2007年普洱熟茶低剂量组，1997年普洱生茶高剂量组、1997年普洱生茶低剂量组、1997年普洱熟茶高剂量组、1997年普洱熟茶低剂量组，每组12只。除正常组外，各组均预防性给予相应药液（模型组给予生理盐水，阳性对照组给予二甲双胍或非诺贝特，普洱茶组给予相应普洱茶药液），观察对代谢综合征形成的影响。开始试验时、试验中每周及试验结束时均测量大鼠体重、Lee’s指数，喂养7周后，测定全部大鼠血脂水平，检测胰岛素敏感指数（ISI），并进行统计学处理。
结果：对高脂高糖喂养大鼠诱导形成的代谢综合征， 1997年普洱熟茶高剂量、1997年普洱熟茶低剂量、2007年普洱熟茶高剂量能够明显减少大鼠体重增加；2007年普洱生茶高剂量、2007年普洱生茶低剂量、2007年普洱熟茶高剂量、2007年普洱熟茶低剂量，1997年普洱生茶高剂量、1997年普洱熟茶高剂量、1997年普洱熟茶低剂量均能明显降低大鼠Lee’s指数，改善腹型肥胖；2007年普洱生茶高剂量、1997年普洱生茶高剂量、1997年普洱熟茶高剂量、1997年普洱熟茶低剂量均可明显降低血清甘油三酯浓度。见表1～3：
表1 对体重增加率及Lee’s指数的影响（, n=12 ）
|
组 别
|
动物样本数(N)
|
体重(g)
|
体重增加率(%)
|
体重系数(Lee’s指数)
|
|
造模前
|
第7周末
|
|
正 常组
|
12
|
162.8±14.9
|
271.9±17.4
|
68.0±10.5
|
291.5±7.3
|
|
模 型组
|
12
|
159.6±12.8
|
311.5±24.0△△
|
108.0±19.8△△
|
297.4±4.8△
|
|
二 甲双胍组
|
12
|
160.6±10.1
|
269.5±37.9**
|
80.0±19.7**
|
288.5±7.6**
|
|
非 诺贝特组
|
12
|
157.0±12.2
|
291.5±25.4*
|
86.0±16.8**
|
290.6±6.4**
|
|
07 生高
|
12
|
158.7±16.7
|
295.4±22.8
|
99.0±30.8
|
291.4±6.0**
|
|
07 生低
|
12
|
160.3±23.2
|
297.3±35.7
|
94.0±23.4
|
287.2±6.3**
|
|
07 熟高
|
12
|
161.9±10.1
|
286.3±33.1*
|
89.0±15.2**
|
294.5±4.7*
|
|
07 熟低
|
12
|
157.2±9.9
|
292.2±35.5
|
99.0±20.0
|
291.8±8.7*
|
|
97 生高
|
12
|
163.5±11.8
|
306.4±30.3
|
102.9±33.2
|
290.9±7.6**
|
|
97 生低
|
12
|
158.6±7.7
|
301.6±24.2
|
98.0±14.8
|
294.1±7.4
|
|
97 熟高
|
12
|
162.8±12.5
|
299.6±36.6
|
85.0±22.2**
|
289.5±4.4**
|
|
97 熟低
|
12
|
161.3±15.4
|
299.6±35.1
|
86.0±18.5**
|
291.9±5.7**
|
与正常对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01;与模型组比较，*P<0.05,* *P<0.01
表2 对血清TC、TG、HDL-CHO及LDL-CHO的影响（, n=12）
|
组 别
|
动物样本数(N)
|
TC
|
TG
|
HDL-CHO
|
LDL-CHO
|
|
( mmol/L )
|
|
正 常组
|
12
|
1.487±0.498
|
0.609±0.170
|
0.367±0.065
|
0.692±0.306
|
|
模 型组
|
12
|
2.356±0.618△△
|
0.623±0.184
|
0.238±0.076△△
|
1.278±0.624△△
|
|
二 甲双胍组
|
12
|
1.842±0.649*
|
0.515±0.287
|
0.249±0.061*
|
0.837±0.374*
|
|
非 诺贝特组
|
12
|
1.832±0.407*
|
0.531±0.227
|
0.232±0.122
|
1.062±0.484
|
|
07 生高
|
12
|
2.590±0.427
|
0.402±0.146**△△
|
0.244±0.067
|
1.366±0.410
|
|
07 生低
|
12
|
2.229±0.517
|
0.703±0.143
|
0.261±0.067
|
1.189±0.398
|
|
07 熟高
|
12
|
2.642±0.606
|
0.673±0.102
|
0.222±0.045
|
1.326±0.489
|
|
07 熟低
|
12
|
2.678±0.739
|
0.461±0.352
|
0.242±0.056
|
1.537±0.537
|
|
97 生高
|
12
|
2.453±0.760
|
0.400±0.220**△△
|
0.255±0.071
|
1.316±0.804
|
|
97 生低
|
12
|
2.633±0.813
|
0.412±0.376
|
0.274±0.068
|
1.649±0.737
|
|
97 熟高
|
12
|
2.263±0.567
|
0.314±0.141**△△
|
0.258±0.068
|
0.938±0.532
|
|
97 熟低
|
12
|
2.475±0.517
|
0.279±0.221**△△
|
0.212±0.058
|
1.138±0.608
|
与正常对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01;与模型组比较，*P<0.05,* *P<0.01
表3 对胰岛素敏感性指数(ISI)的影响（, n=12 ）
|
组 别
|
动物样本数(N)
|
FPG
|
FINS
|
ISI
|
|
( mmol/L )
|
|
正 常组
|
12
|
11.886±4.194
|
19.04±3.62
|
-5.33±0.45
|
|
模 型组
|
12
|
9.921±2.902
|
28.95±4.19△△
|
-5.61±0.34△
|
|
二 甲双胍组
|
12
|
12.530±3.339*
|
18.91±4.87**
|
-5.41±0.38
|
|
非 诺贝特组
|
12
|
9.348±3.977
|
23.03±6.82*
|
-5.25±0.55*
|
|
07 生高
|
12
|
8.625±2.281
|
27.46±8.40
|
-5.39±0.48
|
|
07 生低
|
12
|
7.818±3.859
|
26.51±7.92
|
-5.37±0.52
|
|
07 熟高
|
12
|
9.752±2.961
|
23.43±6.14**
|
-5.36±0.43
|
|
07 熟低
|
12
|
8.936±2.690
|
27.53±10.82
|
-5.40±0.41
|
|
97 生高
|
12
|
9.501±4.191
|
26.59±10.99
|
-5.39±0.52
|
|
97 生低
|
12
|
10.397±4.066
|
26.58±7.57
|
-5.52±0.61
|
|
97 熟高
|
12
|
10.752±3.598
|
24.59±10.57
|
-5.45±0.59
|
|
97 熟低
|
12
|
11.360±4.819
|
26.23±12.86
|
-5.55±0.66
|
与正常对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01;与模型组比较，*P<0.05,* *P<0.01
2、大益普洱茶对小鼠脂肪排出的影响
参照文献 [6,7,8]，取昆明种小鼠110只, 每组10只,雌雄各半,随机分为11组 ①正常对照组: 灌胃给予等体积NS 0.1 ml/只; ②赛尼可组：给予赛尼可 mg/kg。③各普洱茶组按表给茶，连续5天。末次给药后30分钟,除正常对照组外i.g脂肪乳0.1ml/只。禁食不禁水，收集36h内的粪便，按方法测脂肪排出量。
结果：除1997年熟饼高剂量组外，各年代普洱茶组脂肪排出量均高于模型组，各组差异有显著性意义(P<0.05)。表明普洱茶能增加小鼠脂肪的排出。见表4：
表4 普洱茶对小鼠脂肪吸收的影响（）
组别 动物数(只) 剂量g/kg 脂肪排出量(g)
正常对照组 10 等体积NS 0.0140±0.003
模型组 10 等体积NS 0.0174±0.016△
赛尼可组 10 0.50 0.0237±0.011△*
97熟高 10 3.20 0.0166±0.010
97熟低 10 0.64 0.0188±0.011△*
97生高 10 3.20 0.0217±0.008△*
97生低 10 0.64 0.0191±0.003△*
07熟高 10 3.20 0.0174±0.003△
07熟低 10 0.64 0.0191±0.008△*
07生高 10 3.20 0.0188±0.006△*
07生低 10 0.64 0.0209±0.008△*
注：与正常对照组比，△P<0.05；与模型组比，* P<0.05。
3、大益普洱茶对小鼠木糖吸收的影响
参照文献[6]，取昆明种小鼠160只, 每组16只,雌雄各半,随机分为10组 ①正常对照组:灌胃给予等体积NS 0.1ml/只;②二甲双胍组：给予盐酸二甲双胍500mg/kg（含盐酸二甲双胍0.25g/kg）。③各普洱茶组按表给药，连续7天。实验前禁食12h,不禁水,末次给药后30分钟,分别灌胃给予3%木糖0.2ml/10g,1h后取血,静置30分钟，3000rpm,10min,测定血清D-木糖含量。
结果：各年代普洱茶高、低剂量组血清木糖含量均低于正常对照组，除1997年熟饼低剂量组外(P<0.05)，其余各组差异有非常显著性意义(P<0.01)。与阳性对照组二甲双胍相比，2007年生饼高剂量组差异有显著性意义(P<0.05)。表明普洱茶可减少木糖的吸收。见表5：
表5 普洱茶对小鼠木糖吸收的影响（）
组别 动物数(只) 剂量g/kg 木糖含量(mmol/L )
正常对照 15 等体积NS 1.03±0.26
二甲双胍组 14 0.50 0.49±0.15△△
97熟高 16 3.20 0.84±0.30△
97熟低 16 0.64 0.92±0.31
97生高 16 3.20 0.52±0.13△△
97生低 14 0.64 0.48±0.15△△
07熟高 15 3.20 0.58±0.21△△
07熟低 16 0.64 0.42±0.14△△
07生高 16 3.20 0.28±0.05△△
07生低 15 0.64 0.31±0.10△△
注：与正常对照组比，△P<0.05,△△P<0.01；
4、大益普洱茶对大鼠胃酸、胃蛋白酶的影响
参考文献[9]135只健康Wistar大鼠，按体重与性别随机分成9组，即正常组、普洱茶组：1997年生茶高剂量组、1997年生茶低剂量组、1997年熟茶高剂量组、1997年熟茶低剂量组、2007年生茶高剂量组、2007年生茶低剂量组、2007年熟茶高剂量组、2007年熟茶低剂量组，每组15只，雌雄各半，普洱茶各剂量组动物分别按下表所示剂量给予普洱茶水煎液茶饮，正常对照组给水，连续给茶9天，禁食不禁茶/水24小时后，10%水合氯醛0.3 ml/100g腹腔注射麻醉，打开腹腔，分别向胃内注射2ml生理盐水，结扎幽门，关闭腹腔，2小时后结扎贲门，取全胃，沿胃大弯剪开，收集胃液，2000转/分钟离心5分钟，取上清液，用PH仪测量胃酸值，取胃液0.04ml按剂量盒要求测定胃蛋白酶活力。
结果：普洱茶1997年熟茶、2007年生茶、2007年熟茶，高低剂量组明显提高大鼠胃蛋白酶活力，而对胃酸分泌无影响。见表6：
表6 普洱茶对正常大鼠胃酸、胃蛋白酶的影响。（）
|
组 别
|
n
（只）
|
剂 量
（g/kg）
|
胃酸
（PH值）
|
胃蛋白酶活力
（U）
|
|
正常对照组
|
12
|
等容积
|
1.90±0.41
|
105.95±64.05
|
|
97年生高
|
12
|
2.25g/kg
|
1.81±0.55
|
100.83±71.46
|
|
97年生低
|
10
|
0.45g/kg
|
2.03±0.56
|
132.14±60
|
|
97年熟高
|
13
|
2.25g/kg
|
2.47±1.36
|
153.57±46.1*
|
|
97年熟低
|
11
|
0.45g/kg
|
1.95±0.34
|
157.4±36.24*
|
|
07年生高
|
11
|
2.25g/kg
|
2.13±0.62
|
163.51±48.47*
|
|
07年生低
|
11
|
0.45g/kg
|
2.43±0.89
|
163.81±34.61*
|
|
07年熟高
|
11
|
2.25g/kg
|
2.00±0.36
|
148.57±35.58*
|
|
07年熟低
|
11
|
0.45g/kg
|
2.50±0.95
|
151.04±51.02*
|
注：各组与正常对照组相比， *P<0.05
5、大益普洱茶对免疫低下小鼠单核-巨噬细胞系统碳粒廓清功能的影响
参考文献方法[10，11]，经预试，取昆明种小鼠300只, 雌雄各半,体重20±2g ,随机分为正常组、模型组、阳性对照组(匹多莫德，按5倍等效量即1040mg/kg体重给药) 和1997年产生茶（97生）、1997年产熟茶（97熟）、2001年产生茶（01生）、2001年产熟茶（01熟）、2007年产生茶（07生）、2007年产熟茶（07熟）各高低剂量组，每组20只。1997、2001、2007三年代的各生熟普洱茶高、低剂量组分别按3.25g/kg体重、0.65g/kg体重将茶液掺入水瓶口服给与（每日给水70ml/10只小鼠）,每天1次,连续7天,正常组和模型组则给予等体积自来水。第5天除正常组外，其余各组每只小鼠腹腔注射环磷酰胺（Cy）50mg/kg体重，连续3天。第8天每鼠尾静脉注入经稀释的印度墨汁(0.10 ml/10 g),2min(t1)和10min(t2)后分别从眼底静脉丛取血40μl,并将其加到4 ml经离心的0.1%Na2CO3溶液中,用752N分光光度计在600nm波长处分别测定其吸光度值OD1(2min取血所测吸光度值)和OD2(10 min取血所测吸光度值),以0.1%Na2CO3溶液作空白调零。
结果：模型组动物碳粒廓清指数K及吞噬指数α明显低于正常组，表明用此剂量的Cy能造成小鼠免疫低下模型；阳性对照药匹多莫德及三年代的生熟普洱茶各剂量均能不同程度地提高Cy模型小鼠碳粒廓清指数K及吞噬指数α；提示三年代的生熟普洱茶均可增强免疫低下小鼠的巨噬细胞吞噬功能，见表7：
表7 对Cy诱导免疫低下小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响( )
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组 别
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动物数（n）
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碳廓清指数K
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吞噬指数α
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正常组
模型组
匹多莫德
97生低
97生高
97熟低
97熟高
01生低
01生高
01熟低
01熟高
07生低
07生高
07熟低
07熟高
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20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
20
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0.0313±0.004
0.0273±0.0064△
0.0323±0.0051*
0.031±0.0079
0.0321±0.0074
0.0271±0.0067
0.0306±0.0061
0.0326±0.007*
0.0316±0.0058
0.0302±0.0091
0.0322±0.01
0.0301±0.0125
0.0316±0.0076
0.0296±0.0089
0.0336±0.077*
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4.668±0.433
4.012±0.686△△
4.507±0.494*
4.932±0.751**
5.68±0.65***
4.709±0.82*
5.074±0.546***
4.803±0.606**
5.42±0.811***
5.157±0.752***
5.229±1.109**
5.1±0.989**
5.49±0.514***
5.207±1.02**
5.471±0.736***
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注：与正常组相比：△P < 0.05，△△P < 0.01，
与模型组相比：*P < 0.05，**P < 0.01，***P < 0.001
三、讨论
饮用普洱茶在我国有着悠久的历史，在长期的饮用过程中人们逐渐认识并掌握了普洱茶的许多保健功效。《本草纲目拾遗》：“普洱茶性温味香，……味苦性刻，解油腻牛羊毒。”《滇南闻见录》：“团茶，能消食理气，去积滞，散风寒，最为有益之物。”《随息居饮食谱》：“茶微苦微甘而凉，清心神醒睡，除烦，凉肝胆，涤热消痰，肃肺胃，明目解渴。普洱产者，味重力竣，善吐风痰，消肉食……。”由此可见，普洱茶具有解除油腻、健胃消食等功效。普洱茶因其确切的减肥作用，在民间有“美容茶”、“减肥茶”、 “窈窕茶”等称谓。
代谢综合征（MS）的形成与饮食和生活习惯密切相关，包括多种代谢紊乱症候群，其中脂质代谢异常是MS的主要组分，由于机体代谢异常而引起以中心性肥胖为核心，合并血压、血糖、血脂紊乱的系列症状。MS现已被证明是心血管疾病以及糖尿病等多种病症的高危因素，如果不进行即时而有效干预，可直接促进动脉粥样硬化性心血管疾病（ASCVD）和2型糖尿病等的发生和发展。
近年来，随着人们生活方式向电脑前办公、长时间静坐，下班后还是静坐乘车返回寓所，步行等有氧运动明显减少的转变，全世界体重超标的人数逐年增高，MS呈攀升之势，中国2000～2001年35～74岁的成年人MS的患病率为16.5%[12]，已成为一种新的慢性疾病。为了预防将来的心血管事件，在尚处于高风险而无临床症状的阶段积极、合理预防和治疗MS，降低风险，已突显为公共卫生所面临的一项重要挑战。
在当前慢性非传染性疾病领域,MS所包含的临床症候群是影响人类健康最主要的原因之一,也是生活方式疾病中主要的疾病群。2005年10月,美国心脏学会和美国心肺血液研究所(AHA/NHLBI)发表声明,MS的一线治疗为生活方式干预,无效时才考虑药物治疗。说明在MS的治疗原则中,防重于治。
养生保健是中国传统医学的特色,其中饮茶、药膳、太极拳、针灸推拿是简、便、廉、验预防MS的方法。太极拳是典型的有氧运动,不仅适合普通人群预防MS,而且对高龄伴有多种并发症的MS患者有辅助治疗的作用。结合《本草纲目拾遗》“普洱茶性温味香，……味苦性刻，解油腻牛羊毒”等的本草文献记载以及我们最近对普洱茶的研究分析，相对于太极拳等有氧运动，饮茶无疑是一项更易于推广的预防MS的有益的生活方式。我们的研究表明，各年代大益普洱茶水煎浓缩液对高脂高糖饮食诱导的大鼠MS的形成有不同程度的干预作用,能明显减轻给予高脂高糖喂养诱导形成的MS大鼠的体重及Lee’s指数，改善腹型肥胖及脂代谢紊乱；脂肪平衡实验表明，不同年代的普洱茶生、熟茶均可增加脂肪的排出，抑制小肠对木糖的吸收，证明普洱茶具有抑制糖吸收、增加脂肪排出的作用，提示普洱茶能通过减少肠道吸收，减轻肥胖从而预防代谢综合征。
我们所开展的炭粒廓清实验结果还表明，各年代大益普洱茶均能不同程度地提高Cy诱导的免疫低下小鼠的巨噬细胞碳粒廓清指数K及吞噬指数α，明显改善低下的非特异性免疫功能，增强机体抗病能力。
MS的病因虽然尚不十分清楚，但通常认为是在遗传的背景下,由不良生活方式所导致的血脂异常、中心性肥胖、胰岛素抵抗、高胰岛素血症、糖尿病、高血压、微量白蛋白尿、高凝状态、高半胱氨酸血症等多种病理征状的聚集，其中胰岛素抵抗(IR)是这些病理征状的核心环节,而超重或肥胖，尤其是中心性肥胖是导致IR的关键因素。
综上所述，坐到电脑旁工作前喝上一杯热茶、在电脑前久坐工作的间隙喝杯茶、下班回家饭前饭后喝杯茶，对于坐多动少的MS高危的现代人，无疑是值得倡导的生活方式，建议以喝茶代替抽烟和过量饮酒。
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